ГОРОДЕЦКОГО МЕТОДЫ (В. К. Городецкий, сов. биохимик, род. в 1931 г.) — методы количественного и качественного определения глюкозы в крови и моче, основанные на окислении глюкозы кислородом воздуха в присутствии фермента глюкозооксидазы. Городецкого методы широко применяются в практике клинических биохимических лабораторий для диагностики и контроля за лечением ряда патологических состояний, сопровождающихся нарушением углеводного обмена (диабета, острого панкреатита, панкреатических циррозов, повышения гормональной активности щитовидной железы, коры и мозгового слоя надпочечников, гипофиза и др.).

Метод определения глюкозы в крови

Разработан в 1960 г. В. К. Городецким и представляет собой модификацию методов Миддлтона и Гриффитса (J. E. Middleton, W. J. Griffiths, 1957) и Маркса (V. Marks, 1959). В предложенной модификации, в отличие от оригинальных работ, расходуется меньшее количество крови на одно определение (0,1 мл); для приготовления энзимохромогенного реактива используется ацетатный буфер pH 4,8 и выпускаемый отечественной промышленностью препарат глюкозооксидазы. Глюкоза окисляется глюкозооксидазой (КФ 1.1.3.4) до глюконовой к-ты с образованием перекиси водорода.

Перекись водорода разлагается пероксидазой (КФ 1.11.1.7); выделившийся атомарный кислород окисляет хромогенный кислородный акцептор (орто-толидин или некоторые другие производные бензидина) с образованием соединения, окрашенного в синий цвет. Интенсивность окраска пропорциональна концентрации глюкозы. Количественное определение глюкозы в крови заключается в сравнении оптической плотности испытуемого р-ра с окраской стандартных р-ров глюкозы.

Ход определения. Исследование проводится в цельной капиллярной или венозной крови немедленно после взятия. Белок осаждается следующим образом: в пробирку, содержащую 1,1 мл физиол, р-ра, приливают 0,1 мл крови, добавляют по 0,4 мл 5% р-ра сернокислого цинка и 0,3 н. р-ра едкого натра, смесь перемешивают и через 10 мин. центрифугируют при 2500—3000 об/мин в течение 10—15 мин. К 1 мл надосадочной жидкости добавляют 3 мл энзимохромогенного реактива — смеси, приготовленной на 0,25 М ацетатном буфере pH 4,8 и содержащей в 100 мл 1—2 мг глюкозооксидазы (в зависимости от степени очистки и активности ферментного препарата), 1 мг пероксидазы и 10 мг орто-толидина (1 мл 1% р-ра в абсолютном этаноле). Через 13—20 мин. пробу колориметрируют при 625 нм против контрольной пробы, состоящей из 1 мл дист, воды и 3 мл энзимохромогенного реактива. Для установления точного времени развития максимальной окраски первую пробу колориметрируют через каждую минуту, начиная с десятой. Оптическая плотность остальных проб серии измеряется после определения максимума окраски по достижению ею стабильности. Аналогичным образом обрабатываются стандартные р-ры глюкозы при построении калибровочной кривой. Расчет производят по этой кривой, к-рую строят для каждой серии проб, или по соответствующей формуле:

где Скр— концентрация глюкозы в крови в мг%; Сс — концентрация глюкозы в стандартном р-ре в мг%; ЕКР — оптическая плотность крови; Ес — оптическая плотность стандартного р-ра; n — число контрольных проб со стандартным р-ром; ? — сумма величин отношений экстинкций.

Прямо пропорциональная зависимость между содержанием глюкозы и интенсивностью окраски сохраняется в пределах от 20 до 400 мг%.

Метод высокоспецифичен, позволяет избирательно определять глюкозу в присутствии различных сахаров и других редуцирующих веществ неуглеводной природы, чувствителен, быстр, прост в исполнении, хорошо воспроизводим, не требует дорогих реактивов и оборудования. Недостатком метода является низкая стабильность образующейся окраски, однако точное соблюдение времени протекания реакции (хронометраж с помощью секундомера) позволяет избежать его.

У здоровых людей концентрация глюкозы в крови, определяемая глюкозооксидазным методом, равна в среднем 67 мг% (от 56 до 94 мг%).

Метод определения глюкозы в моче. Для быстрого определения глюкозы в моче в клиниках широко применяется экспресс-метод «Глюко-тест» в модификации В. К. Городецкого. Определение содержания глюкозы производится с помощью тест-полосок хроматографической бумаги 0,5 X 5,0 см, поперек которых нанесена полоска желтого цвета, пропитанная смесью, содержащей ферменты глюкозооксидазу и пероксидазу, дигидрохлорид орто-то ли дина, цитратный буферный р-р, желатину и желтый краситель аурамин. Тест-полоску погружают в собранную натощак свежую мочу, быстро извлекают pi выдерживают 2 мин. Если в моче есть глюкоза, то желтая полоса окрашивается в зеленый цвет, интенсивность к-рого зависит от концентрации глюкозы. В отсутствие глюкозы цвет желтой полосы не меняется. При полуколичественном определении точно через 2 мин. окраску сравнивают со стандартной цветной шкалой, при помощи к-рой определяют концентрацию глюкозы в процентах. Проба высокоспецифична, более чувствительна, чем качественные редуктометрические пробы Гайнеса и Ниландера.

Выпускаемые наборы полосок «Глюкотест» предназначаются для определения концентрации глюкозы в моче в пределах от 0,1% до 2% и выше. Первые выпуски наборов обладали более высокой чувствительностью (определяли 0,02% глюкозы и даже меньшую концентрацию), однако по просьбе потребителей чувствительность тест-полосок была доведена до существующего уровня. Эта чувствительность больше отвечает основному назначению «Глюкотеста» — быстрой постановке диагноза диабета и немедленному началу лечения и контролю за его ходом.

В СССР Городецкого методы приняты в качестве унифицированных для количественного определения глюкозы в крови и качественной пробы на глюкозу в моче.

Библиография: Городецкий В. К. Энзиматический метод количественного определения глюкозы в крови с помощью отечественного препарата глюкозооксидазы, в кн.: Совр, методы в биохимии, под ред. В. Н. Ореховича, т. 1, с. 311, М., 1964; Городецкий В. К. и Лукомская И. С. Изготовление и применение тест-бумажек для экспресс-метода определения глюкозы в моче, Вопр. мед. химии, т. И, в. 5vc. 91, 1965.

^

Источник: Большая Медицинская Энциклопедия (БМЭ), под редакцией Петровского Б.В., 3-е изданиематрица судьбы практика